Conjunto para coloração de Ziehl Neelsen

Conjunto para coloração de Ziehl Neelsen


Conjunto de coloração para pesquisa de bacilos álcool acido resistente.

Apresentação:

Kit conteúdo:
1 frasco de fucsina Ziehl Neelsen com 500 ml ;
1 frasco d azul de metileno com 500 ml .
1 frasco de álcool acido de 500 ml.


Composição:

Fucsina fericada de Ziehl : fucsina básica 10,0 g/l.
Fenol fundido 50,0 ml/l; Álcool etílico 100,0 ml/l.

Azul de metileno: Azul de metileno : 3,0g/l Fenol fundido 50,0ml/l; álcool etílico 100,0ml/l .

Álcool acido: Ácido clorídrico 30,0 ml/l ; álcool etílico 970,0ml/l

Informações Técnicas :

A coloração de Ziehl-Neelsen baseasse na capacidade de algumas bactérias (microbacteria e actinomicetes) resistirem aos métodos comuns de coloração devido à composição altamente lipídica da parede celular. Após um processo de coloração especial a quente uma vez coradas não sofrem ação de descorantes fortes como solução de álcool acido. Desta forma, a fucsina de Ziehl cora todas as bactérias de vermelhos, e após de descoloração com álcool – acido somente os bacilos álcool – acido resistente (b.a.a.r) conservarão está cor. para facilitar a visualização cora-se o fundo com azul metileno , estabelecendo–se contraste nítido entre elementos celulares e outras bactérias (azuis) e os b.a.a.r (vermelhos)

Técnica de coloração :

1º Cobrir a lâmina com solução de Fucsina fenecida de azul
2º Com uma chama fraca sob a lâmina (de lamparina a álcool por exemplo) aquecer suavemente até a emissão de vapores, durante 5 minutos. Evitar ebulição evoparação do corante.
3º Lavar rapidamente em água corrente.
4º Inclinar a lâmina e cotejar a solução descorante sobre o esfregaço, até que não escorra mais liquido vermelho.
5º lavar em água corrente novamente.
6º Cobrir a lâmina com solução de azul de metileno deixar agir por 40 segundos e 1 minuto.
7º lavar em água corrente e secar entre duas folhas de papel de filtro.
8º levar a microscópio para proceder a leitura.

Leitura e interpretação dos resultados:

Procede a leitura com o objetivo de imersão. Os bacilos álcool – ácido resistentes aparecem como bastonetes finos vermelhos isolados ou agrupados, encurvados e nodulados.

Técnica de confecção do esfregaço:

Fazer suspensão das bactérias – teste conforme a escala 0,5 mac Fariamil.
Fazer 2 esfregaço na mesma lâmina um de bactéria controle positivo, e outra de contraste positivo , com alça 1:1000
Corar como de rotina.

Cuidados com a amostra

Por tratar–se de material clinico potencialmente contaminado, manusear todos os testes de acordo com normas de biossegurança e utilizando equipamento de proteção individual (luvas, avental e mascara), em luxo laminar.

Referencia bibliográfica.

_Filoneto, M Pilonetto,C.V. manual de procedimentos laboratoriais em microbiologia – POPs em Microbiologia. Curitiba microscience, 1998.

_Farmacopéia dos Estados Unidos do Brasil. 2ª ed. São Paulo: Siqueira. 1959.

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CONJUNTO PARA COLORAÇÃO DE GRAM (NEWPROV)

APRESENTAÇÃO.

Kit contendo:
1 frasco de cristal violeta com 500ml.
1 frasco de lugol para Gram com 500ml.
1 frasco de álcool-acetona.

COMPOSIÇÃO.

Cristal-violeta: Crista violeta: 10,0g/l; Álcool etílico absoluto 100,0ml/l; Oxalato de amônio: 8,0g/l.

Lugol para Gram: Lugo: 0,333ml/l

Álcool-acetona: Acetona P.A. ; 300,0ml/l; Alcoo etílico absoluto 700,0ml/l.

Fucsina fenicada de gram: Fucsina fenicada de Ziehl Nielscen 100,0ml/l.

INFORMAÇÕES TÉCNICAS.

O método de Gram (1884) basea-se no fato de que: quando certas bactérias são coradas pelo cristal violeta e depois tradados pelo lugol, forma-se um composto de coloração escura entre o iodo e o corante (iodopararrosalina), o qual é fortemente retido pelas bactérias e não pode ser facilmente removido pelo tratamento subseqüente com álcool-acetona: São as bactérias Gram positivas ou que tomam o Gram. Outras bactérias ditas Gram negativas deixam-se descorar facilmente pela solução de álcool-acetona.
Assim sendo, se após a ação do álcool-acetona, fizermos uma coloração de fundo pela fucsina, as bactérias Gram-negativas aparecerão vermelhas, ao passo que as Gram-positivas aparecerão roxas, isto é conservarão a cor violeta.
Esta reação é de grande importância para a sistemática bacteriana, sendo que os cocos são geralmente gram-positivos, com exceção dos pertencentes ao gênero Neisseria (gonococos e meningococos) enquanto os Bacilos geralmente são Gram-negativos, com exceção dos pertencentes ao gênero Corynebacterium (bacilo diftérico). Bacttus (bacilo de carbúnculo) e Clostridiunm (bacilo do tétano).

TÉCNICA DE COLORAÇÃO.

Recobrir a lâmina com solução de cristal violeta e deixar por 30 seundos a um minuto. Escorrer o excesso de corante.
Sem lavar com água, verter sobra a lâmina a solução de lugol para gram, deixar agir durante um minuto, verter fora o excesso de solução.
Ainda sem lavar a preparação, recobri a lâmina com solução de Álcool-acetona e lavar a lâmina com esta solução até que a cor roxa cesse de desprender-se.
Lavar com água.
Corar com a Fucsina Fenicada de Gram durante 30 segundos.
Escorrer o corante e lavar com água. Secar e proceder a leitura com objetivo de imersão.

LEITURA E INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS.

Proceder a leitura com objetiva de imersão. Os cocos são geramente gram positivos, com exceção dos pertencentes ao gênero Neisséria (gonococos e meningococos) enquanto os Bacilos geralmente são Gram-negativos, com exceção dos pertencentes ao gênero Corynebacterium (bacilo diftérico). Bacttus (bacilo de carbúnculo) e Clostridiunm (bacilo do tétano). Esta coloração é de grande valia no diagnóstico presumitivo das infecções bacterianas especialmente aquelas que acomentem sítios anatômicos normalmente estéreis (Meningites bacterianas). Outra utilidade extremamente importante é a sua aplicação na avaliação da qualidade das amostras clinicas (escarros, feridas superficiais).

TÉCNICA DE CONFECÇÃO DO ESFREGAÇO.
Obs: mesma que do Ziell Neelsen.

Bibliografia:

_Filoneto, M Pilonetto,C.V. manual de procedimentos laboratoriais em microbiologia – POPs em Microbiologia. Curitiba microscience, 1998.

_Farmacopéia dos Estados Unidos do Brasil. 2ª ed. São Paulo: Siqueira. 1959.